La HPLC

Hace un par de meses os introduje en la cromatografía con la entrada dedicada a la cromatografía gaseosa. Hoy os voy a hablar de la cromatografía líquda de alta presión/resolución (HPLC por sus siglas en inglés, High Pressure/Performance Liquid Chromatography).

Os recuerdo que la cromatografía es un método de separación física en el que entran en juego una fase móvil, que es la que porta la muestra, y una fase estacionaria, metida en una columna, y que es la que se encarga de retener los distintos componentes de la muestra en función del criterio oportuno. Este criterio se define por el tipo de interacción entre los componentes de la muestra y la fase estacionaria, y puede ser en base a tu tamaño (cromatografía de exclusión molecular) o en base a su atracción electrostática (cromatografía iónica). La interacción entre los distintos componentes de la muestra y la fase estacionaria definirá el tiempo de retención o tiempo que tardan en salir de la columna.

Esquema explicativo del funcionamiento de la cromatografía.

En la HPLC, la fase móvil es líquida y la fase estacionaria es sólida y está altamente empaquetada en el interior de una columna. 

Modelo explicativo del alto empaquetamiento que tiene una columna de HPLC

Este tipo de cromatografía consiste en hacer pasar la muestra a muy alta presión (hasta 400 atmósferas) a través de esta fase estacionaria. 

Columna de HPLC

La HPLC se aplica en el estudio de bienes culturales para analizar mezclas complejas de compuestos no volátiles y termolábiles (es decir, que se desnaturalizan con un incremento de temperatura), como pueden ser los aminoácidos que forman las proteinas constituyentes de algunos aglutinantes o los compuestos orgánicos de algunos colorantes naturales.

A modo de ejemplo os dejo el estudio de una muestra de policromía (retablo de San Mateo, Lucena, Córdoba) sacado de La Ciencia y el Arte.

Microfotografía con luz incidente polarizada de una estratigrafía pictórica de una muestra de policromía. El aparejo es de yeso y cola, el pan de oro se asienta sobre un bol aglutinado con cola y la capa superior es de un estofado azul de azurita sobre una imprimación blanca de albayde

  Los cromatogramas de los análisis vienen a continuación.

Cromatograma de cola animal en el aparejo y en el bol (figura superior) y  aglutinante hecho de huevo en el estofado azul (figura inferior)

En este caso, los cromatogramas líquidos determinan el tipo de proteínas a partir de las proporciones de aminoácidos de las capas que se observan en la estratigrafía.


Fuente de las imágenes e información:
http://www.analytics-shop.com/gb/hplc-column-configurator.html
http://www.we06.ugent.be/index.php?content=comoc/matthias
http://biomodel.uah.es/tecnicas/crom/inicio.htm 

Nota: Como dije en la presentación, este blog lo hago con la intención de facilitar la comprensión de las técnicas científicas de análisis a restauradores. Si eres un estudiante de ciencias te recomiendo mirar en otros sitios más especializados porque esto se te quedará corto. Las explicaciones estarán destinadas para facilitar la comprensión a gente con una formación que no sea de ciencias.